鱼细胞凋亡因子(Fas)酶联免疫分析试剂盒专业试剂供应商本试剂盒仅供研究使用。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼细胞凋亡因子(Fas)水平。用纯化的鱼细胞凋
亡因子(Fas)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入细胞凋亡因子
(Fas),再与HRP标记的细胞凋亡因子(Fas)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经
过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转
化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的细胞凋亡因子(Fas)呈正相关。用酶标仪在450nm
波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鱼细胞凋亡因子(Fas)浓度。
试剂盒组成
130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶
2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(48IU/L)0.5ml×1瓶
3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶
4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份
5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张
6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
鱼细胞凋亡因子(Fas)酶联免疫分析试剂盒操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
24IU/L5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液
12IU/L4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液
6IU/L3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液
3IU/L2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液
1.5IU/L1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,
然后再加待测样品10µl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15分钟.
10.终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间
控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值
大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计
算时请*后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照鱼细胞凋亡因子(Fas)酶联免疫分析试剂盒说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月