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elisa试剂盒
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牛呼肠孤病毒(Reo)ELISA试剂盒 2022已更新
点击次数:1402 发布时间:2022/9/7 12:34:02
 
实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛呼肠孤病毒(Reo)表达。用纯化的牛呼肠孤病毒(Reo)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中呼肠孤病毒(Reo)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的呼肠孤病毒(Reo)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中牛呼肠孤病毒(Reo)的存在与否。

试剂盒组成

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1瓶

7

终止液

6ml×1瓶

2

酶标试剂

6ml×1瓶

8

阳性对照

0.5ml×1瓶

3

酶标包被板

12孔×8条

9

阴性对照

0.5ml×1瓶

4

样品稀释液

6ml×1瓶

10

说明书

1份

5

显色剂A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2张  

6

显色剂B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1个

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7. 温育:操作同3。

8. 洗涤:操作同5。

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

计算和结果判定:

  试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.20

  临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15

  阴性判定:样品OD值< 临界值(CUT OFF)者为呼肠孤病毒(Reo)阴性

  阳性判定:样品OD值≥ 临界值(CUT OFF)者为呼肠孤病毒(Reo)阳性。 

 
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